Les secrets de la méthode des 4 quadrants

LABORATOIRE DE DIAGNOSTIQUE DE L’INSTITUT DE MICROBIOLOGIE DU CHUV
Les secrets de la méthode des
4 quadrants
Jérémy Pittet & Valentin Loup
Mme Maria Senra Ortiz, Dr. Antony Croxatto & Dr. Guy Prod’hom
12/03/2014
Ecole Supérieure de la Santé, Lausanne
Figure 1 : Staphylococcus aureus

2
Sommaire
La méthode d’ensemencement en quatre quadrants est la méthode de référence pour la plupart des
prélèvements en microbiologie. Elle permet à la fois une estimation semi-quantitative du nombre de
germes contenus dans un prélèvement et l’obtention de colonies isolées. Le principe est un
épuisement séquentiel du matériel de départ.
L’automatisation des ensemencements au moyen du WASP
I
(Walk Away Specimen Processor)
permet d’obtenir une reproductibilité des mises en culture et représente ainsi une opportunité pour
l’investigation de cette méthode d’ensemencement.
Lors de notre stage de six mois au sein de l’institut de Microbiologie du CHUV, notre travail de
diplôme a permis de tester les limites de cette méthode.
Lors de ce travail nous avons souhaité :
 Visualiser la répartition des germes sur un milieu solide ensemencé avec la méthode des 4
quadrants
 Comparer 2 méthodes d’ensemencements en 4 quadrants disponibles sur le WASP.
 Etablir une corrélation entre la méthode semi-quantitative des 4 quadrants et
l’ensemencement quantitatif.
Mots clés :
WASP Technique Quatre Quadrants Quantitative
I
Pour tous les mots en rouge, se rapporter au « Lexique »

3
Abstract
The four quadrant streak pattern is one of the reference methods for samples inoculation on agar
plate in microbiology. It allows both a semi-quantitative estimation of the number of colony-forming
unit of a microbe in a sample and the obtention of individual colonies.
The automated streaking using the WASP, allows a reproductibility of the inoculation and represent
an opportunity for the investigation of this streaking methods.
During our six month training in the Institute of Microbiology of the Lausanne University Hospital
(CHUV), the goal of our diploma works was to test the limits of this method.
During this work we wished:
 To monitor the distribution of bacteria plated with the four quadrant streak.
 To compare two four quadrant streaking methods available in the WASP.
 To investigate the correlation between the semi-quantitative four quadrant streaking method
and the quantitative seeding method.
Keys words:
WASP Streaking Four Quadrant Quantitative

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TABLES DES MATIERES
1. INTRODUCTION : ............................................................................................................. 6
1.1 Historique de l’isolement .............................................................................................. 6
1.2 La méthode en 4 quadrants : ........................................................................................ 7
1.3 Autres méthodes d’ensemencement : ........................................................................... 8
1.4 L’ensemencement automatisé en microbiologie ........................................................... 9
1.4.1 Les ensemenceurs : ................................................................................................ 9
1.4.2 L’InoqulA : .............................................................................................................. 9
1.4.3 Le Previ-isola ........................................................................................................ 10
1.4.4 Le WASP : ............................................................................................................. 11
2. BUT : ............................................................................................................................. 12
3. MATÉRIEL ET MÉTHODE : .............................................................................................. 12
3.1 Matériel : .................................................................................................................... 12
3.1.1 Les souches ATCC: ................................................................................................ 12
3.1.2 Les milieux de culture : ........................................................................................ 12
3.1.3 Module d’acquisition d’images : .......................................................................... 14
3.2 Les mises en culture du WASP: .................................................................................... 14
3.2.1 La méthode des 4 quadrants Q3 : ........................................................................ 14
3.2.2 La méthode des 4 quadrants Q4 : ........................................................................ 14
3.2.3 La méthode quantitative2 H1: .............................................................................. 15
3.2.4 Le McFarland 0.5, les dilutions et les contrôles : ................................................. 15
3.2.1 La préparation des inoculum polymicrobiens ...................................................... 17
3.3 Déroulement de l’étude .............................................................................................. 18
4. RÉSULTATS : .................................................................................................................. 19
4.1 Test 1 : avec stérilisation ............................................................................................ 19
4.2 Test 1 : sans stérilisation ............................................................................................. 23
4.3 Test 2 : mélange de germe .......................................................................................... 28
4.4 Test 3 : limite supérieure de la méthode ..................................................................... 32
4.5 Test 4 : échantillons cliniques ..................................................................................... 36
5. DISCUSSION : ................................................................................................................ 40
5.1 1ère partie : comparaison des 4 quadrants .................................................................. 40
5.2 2ème partie mixes à différentes concentration ............................................................. 41

5
5.3 3ème partie limite de la méthode ................................................................................. 42
5.4 4ème Echantillons cliniques .......................................................................................... 42
5.5 Variations ................................................................................................................... 42
5.6 Observations ......................................................................... Erreur ! Signet non défini.
5.7 Proposition d’améliorations : ...................................................................................... 46
6. CONCLUSION ................................................................................................................ 47
7. COÛTS ........................................................................................................................... 48
8. REMERCIEMENTS .......................................................................................................... 49
9. BIBLIOGRAPHIE ................................................................... ERREUR ! SIGNET NON DEFINI.
10. TABLE DES ILLUSTRATIONS ............................................................................................ 51
11. REFERENCES ICONOGRAPHIQUES.................................................................................. 54
13. LEXIQUE : ...................................................................................................................... 55
14. GLOSSAIRE : .................................................................................................................. 56
15. ANNEXES : ..................................................................................................................... 57